LC-MS-液相
1）色谱柱分类
色谱柱类型 | 型号 | 通途 |
反相 | C18（键合18烷基） | 通用型，适用于大多数中等极性和非极性化合物，如药物、代谢物、环境污染物、食品分析 |
反相 | C8（键合辛基） | 适用于非极性至中等极性化合物，有时用于蛋白质和多肽分析（缩短分析时间） |
反相 | 苯基 | 适用于芳香族化合物或有特殊空间结构的化合物 |
两性 | 氰基 | 正相模式分离极性化合物，反相模式用于中等极性化合物 |
正相 | 硅胶（键合硅羟基） | 适用于极性化合物的分离，如某些异构体、脂溶性维生素等 |
正相 | 氨基 | 碳水化合物、醛酮类化合物、糖类 |
特殊 | 离子交换柱 | 离子色谱 |
特殊 | 凝胶柱 | GPC |
2）色谱柱说明
反相色谱柱：液相色谱中占比80%，属于最常见的液相色谱柱，固定相是非极性的（C8 C18），流动相使用极性的（水、甲醇、乙腈等），非极性物质出的慢，极性物质先流出
正相色谱柱：流出顺序与反相色谱柱相反，键合大量极性基团，通过相互作用分离物质，极性物质相互作用强，非极性相互作用弱。流出顺序与反相相反。常用非极性有机溶剂（己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷等）
3） 参数与条件
内径（ID） | 分析柱常见 4.6 mm (标准HPLC)，2.1 mm（常见LC-MS） |
长度 (L) | 常见 50 mm, 100 mm, 150 mm。长柱分离度更高但柱压更高；短柱用于快速分析 |
粒径 (dp) | 常见 5 μm (常规HPLC)，3.5 μm, 3 μm (高效HPLC)，1.7-2.2 μm (UHPLC，需要超高压系统)。粒径越小，柱效越高，柱压也越高 |
4.6*250*5 | |
孔径（常见于GPC） | 小孔径 (80-120 Å)： 适用于小分子化合物 (分子量 < 2000 Da) |
大孔径 (200-300 Å)： 适用于大分子如蛋白质、多肽 (分子量 > 5000 Da) | |
1） 液相条件
等度洗脱：流动相一直不改变，常见IC GPC等，适合单一组分，或者组分较少，极性比较集中的物质使用
梯度洗脱：流动相分为A B组分，以水相（A）和有机相（B）为例子。水相为主流动相，使得待分析样样品充分和色谱柱接触与初步分离。增加有机相让组分依次从固定相中被分离
一般准则。水性：从高到低。有机相：从低到高
（正相色谱柱则反过来）
其他影响因素：
1） 缓冲盐：PH条件以及维持缓冲体系，影响保留时间和峰型等，活性离子可以辅助样品与固定相的相互做用。
2） 添加剂： 酸性化合物（甲酸、乙酸等），抑制电离，增加保留时间等，碱性化合物（甲酸铵、乙酸铵等）改善出峰峰形等。
总结：
1、 液相色谱与气相色谱不一样的地方为流动相的变量，气相流动相基本为氮气和氦气，惰性，不影响检测结果，而液相中流动相均为活性物质，检测过程会出峰。
2、 常见的C18 C8均为反相色谱柱，通用型，主要调节与变更来淋洗方式。
3、 淋洗方式因为变量过多一般需要客户进行提供（溶剂种类，添加剂种类，缓冲盐种类，梯度设计等）。不同条件对结果影响非常大。
1） 单一物质，样品组成单一可不限制。
2） 复杂样品需要有，挂靠标准，文献，其他文件等，这是一个基础，其他所有优化都是基于基本条件，我们没法变一个条件出来。
3） 复杂样品分离，定量等，提供不了条件的一律建议方法研究与开发。
